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Hatching asistido
El hatching asistido es una técnica complementaria a los procesos de Fecundación in Vitro que consiste en la apertura de un pequeño orificio en la zona pelúcida (cubierta) que rodea al embrión. Esta zona pelúcida permite la entrada de un espermatozoide y evita los ataques inmunes, la toxicidad y las presiones físicas.
El Dr. Vicente Badajoz, coordinador de Laboratorio de la clínica Ginefiv, ha explicado en su ponencia “Eclosión asistida y técnicas afines. Transferencia nuclear citoplasmática”, que “el primer paso de implantación es la eclosión o hatching del blastocito y unión a las células del endometrio. La implantación se inicia cuando el desarrollo del embrión está sincronizado con el estado receptivo del endometrio”.
Esta técnica, que nació hace 19 años, puede hacerse de diferentes formas. Así, el hatching mecánico fue uno de los primeros en utilizarse y consiste en atravesar la zona pelúcida mediante fricción. Sin embargo, el Dr. Badajoz asegura que “posee una alto porcentaje de embriones dañados y no se controla el tamaño del orificio”. El hatching químico, por su parte, es un proceso seguro para el embrión y es, según el Dr. Badajoz, “el más utilizado en los centros de reproducción. Se puede hacer, además, con láser que presenta la ventaja de ser un proceso exacto y seguro pero que, sin embargo, presenta un riesgo de sobrecalentamiento de las células embrionarias”. El hatching con disolución enzimática es poco utilizado en los laboratorios de FIV.
Según el Dr. Badajoz, “el hatching asistido está indicado en pacientes con embriones de baja calidad, de edad avanzada, con FSH alta, con fallo de implantación, con embriones de zona pelúcida gruesa, con embriones con muchos fragmentos y con embriones congelados”.
Con respecto a la transferencia nuclear y citoplasmática, el Dr. Vicente Badajoz ha explicado que “consiste en la inyección de citoplasma de ovocito de donante, maduro o inmaduro, para restaurar los defectos en ovocitos del paciente, mejorar la calidad embrionaria y la tasa de implantación”.

GENERALIDADES

Uno de los graves problemas en los Centros de Reproducción Asistida es la aparición de fragmentación en los embriones en período de crecimiento lo cual se refleja en una disminución de las tasas de embarazo. Una de las soluciones fue la implementación de nuevas medidas en el laboratorio así como la introducción de métodos que ayudaran a remover esos fragmentos antes de la transferencia de los embriones. Persuadiéndose al desarrollo de las técnicas de incubación asistida y remoción de fragmentos.

El procedimiento de la eclosión asistida (AHA) fue introducida por primera vez a finales de los años 80s. La observación de que los pre-embriones que se desarrollaban después de la disección parcial de la zona (PZD) poseían una tasa algo más alta de implantación comparada con los preembriones convencionales inseminados, genera la idea de crear artificialmente un espacio en la zona pelucida antes de la transferencia de los embriones al útero. (1).

En 1989, el primer estudio clínico de AHA fue realizado por la Sociedad de Biología Reproductiva de Atlanta, GA, quienes utilizando una técnica de tipo PZD, las zonas de los preembriones de prueba fueron perforadas y rotas para crear una pequeña abertura. Aunque los primeros resultados era promisorios, con un aumento moderado en la tasa de implantación de preembriones mecánicamente incubados, las pruebas siguientes fracasaron en mostrar alguna diferencia estadísticamente significativa entre los grupos de prueba y los de control. Posteriores análisis de este método de crear pequeñas barreras en la zona movible revelaron que el resultado más frecuente era la incubación anormal. El orificio hacía que la zona movible fracasara en volverse más pequeña de la manera usual puesto que los Blastocistos se expandían; entonces, se observó con frecuencia, que los Blastocistos eran parcialmente atrapados dentro del camino medio de la zona a través del proceso de incubación (1). Se postuló, entonces, que unos espacios más amplios y más abiertos podrían facilitar la incubación e vivo y, por consiguiente, promover la implantación.

Para crear un orificio más grande en la zona, se examinó el medio acidic Tyrode´s (AT). Este medio había sido anteriormente utilizado para una técnica llamada zona drilling (perforado de la zona) en donde los orificios eran disueltos en las zonas de los ovocitos antes de la inseminación con la intención de ayudar al proceso de fertilización (2). Aunque se demostró que el medio AT ejerce un leve efecto tóxico cuando se usa en la zona de ovocitos humanos no fertilizados, se observó que sus efectos eran menos dañinos para los embriones en división. Por algún tiempo, el uso de AT se consideraba peligroso antes de la fertilización, y muy rara vez se utilizaba en asocio con los ovocitos. Sin embargo, recientemente, el AT ha vuelto a ganar una cierta popularidad y es usado con los ovocitos, especialmente como resultado de su exitosa aplicación en los procedimientos para la extracción del primer cuerpo polar (3).

Además de estas técnicas PZD y AT, se han investigado otros métodos para facilitar el proceso de incubación. Estas técnicas incluyen las invasoras (crea un espacio en la zona) como las no invasoras (adelgazar y suavizar la zona) (49. Las técnicas invasoras (adelgazar y suavizar la zona) (4). Las técnicas invasoras incluyen ruptura mecánica con PZD, digestión química con AT, quemar un orificio utilizando un láser y, recientemente, la piezomanipulación. Como ya se mencionó, las técnicas PZD han sido virtualmente abandonadas para esta aplicación debido a su asociación con el atrapamiento de preembriones. La digestión acídica es probablemente el procedimiento mejor establecido y el más utilizado (5, 6). Con la introducción de las técnicas de rayos láser, es muy posible crear una abertura en la zona de tamaño uniforme; sin embargo, la eficacia clínica, los asuntos de seguridad, y de costos están aún por tratase (7-9). Finalmente, los procedimientos recientes que utilizan un piezomanipulador han sido alentadores. El aparato parece ser muy efectivo en la manipulación de la zona pellucida (Thomas Huang, comunicación personal).

Las técnicas no invasoras incluyen el adelgazamiento y/o suavización de la zona, cultivando el pre-embrión por un tiempo reducido en presencia de una solución acídica menos fuerte o proteasa (10, 11). Sin embargo, estas técnicas deben ser todavía probadas en los preembriones humano.

La AHA puede realizarse en preembriones que estén en cualquier estado de división, desde la célula dos al blastocisto. La etapa óptima de desarrollo no ha sido aún determinada. La mayoría de grupos realizan el procedimiento el día de la transferencia intrauterina a las 65 a 72 horas posteriores a la inseminación.

El medio AT se aplicó con éxito con AHA en preembriones humanos en 1991 en el Centro Médico de la Universidad de Cornell, NY (13). Las tasas de implantación en el grupo AHA fueron levemente más altas que en el grupo de zona intacta, pero estas diferencias no fueron estadísticamente significativas. El análisis retrospectivo reveló que algunos pacientes se beneficiaban mucho de la manipulación de sus embriones mientras que otros no. Se determinó eventualmente, que los embriones con zona gruesa en algunos pacientes se beneficiaban mucho de la manipulación de sus embriones y beneficiaban mucho de la manipulación de sus embriones y los preembriones de mujeres mayores de 38 años de edad se beneficiaban más con la realización de la AHA. Los preembriones de mujeres más jóvenes con o sin un grosor considerable de la zona, se dejaban mejor solos. Esto llevó a la aplicación de AHA selectivo sobre una base de paciente por paciente después de medir el grosor de la zona y de considerar las características clínicas de la mujer (14).

Cuando se realiza un procedimiento de AHA no selectivo, se manipulan todos los preembriones escogidos para ser transferidos(15). Los protocolos de incubación selectiva requieren que se evalúen ciertos criterios antes de determinar si un preembrión es o no es candidato para el procedimiento. Estos incluyen: edad de la mujer: niveles basales de hormona folículo estimulante (FSH); número de intentos anteriores sin implantación; grado de fragmentación del preembrión; tasa de desarrollo del preembrión; grosor de la zona pellucida; uniformidad de la zona; y color de la zona. Los criterios de inclusión pueden variar de un centro de Reproducción Asistida a otro.

ESTRUCTURA Y FUNCIÓN DE LA ZONA PELUCIDA

La zona pelucida es la capa de glucoproteína que envuelve el ovocito. Se cree que esta estructura no celular es producida tanto por el ovocito como por sus células circundantes durante el comienzo del desarrollo folícular. Parece que la zona pellucida gruesa que se perfora fácilmente durante la AHA; y una capa interna delgada que es más difícil de penetrar (16). Durante el cultivo in vitro, la zona se vuelva frágil y pierde su elasticidad debido a un proceso llamado endurecimiento de la zona (7). Este proceso puede jugar un papel en el tramo para la fertilización polispérmica suministrando un mecanismo de protección del embrión. Por otra parte, el endurecimiento puede dañar el proceso de incubación y por lo tanto, disminuir las opciones de implantación.
La zona pelucida cumple con un número de funciones durante la ovogénesis y el desarrollo inicial del preembrión (que no conozca hasta el momento):

La zona es una barrera física que sirve para proteger los ovocitos y los preembriones de los antígenos durante el período de preimplantación.

La zona es importante durante la interacción esperma/ovocito debido a los receptores de esperma que hay en su superficie; las zonas con receptores de esperma no funcionales pueden inhibir el enlace con el esperma, resultando entonces, en una fertilización fracasada (una indicación para la ICSI).

La zona de un ovocito sano previene la penetración con espematozoides adicionales una vez uno se ha fusionado con el olema (tramo para la polispérmia): por lo tanto, los ovocitos fertilizados en la ausencia de una zona muestran polispermia.

La zona preserva la estructura tridimensional y la integridad del preembrión.
Después de cumplir con su papel durante la maduración de ovocito, la fertilización, y el desarrollo inicial del preembrión, la zona pelucida se desprende; la incubación in vitro del blastocisto (adelgazamiento y ruptura de la zona seguidos de escape del blastocisto) es esencial para un implante exitoso de preembrión. Las anormalidades en la estructura y la función de esta estructura compleja de glucoproteína pueden resultar en una fertilización deteriorada y en una reducida viabilidad del preembrión, y un deficiente pronóstico para la implantación. Parece que crear un orificio artificial en su superficie antes de la transferencia (AHA) facilita la incubación natural y puede ser efectivo para atrapar preembriones con un bajo potencial de implantación.

INDICACIONES PARA LA INCUBACIÓN ASISTIDA

ZONAS PELUCIDAS EVIDENTEMENTE GRUESAS

El Grosor y la rigidez de la zona pelucida están influenciados por el ambiente hormonal pre-ovularorio; las variaciones pueden asociarse con los niveles basales de las FSH y con los altos niveles de estradiol (1. El grosor de la zona varía durante el desarrollo del ovocito y el preembrión. El adelgazamiento comienza durante la primera y la segunda ruptura, y continúa de manera progresiva durante la formación del blastocisto. En la etapa de blastocisto expandido, la zona es tan delgada que se rompe bajo presión. Permitiendo así, que el blastocisto madure. El adelgazamiento está regulado por proteasas como la tripsina producida por división de los preembriones y de los blastocistos (19, 20).

En ausencia del adelgazamiento, y posiblemente como resultado de una deficiente producción de proteasas, el embrión puede ser atrapado dentro de la cubierta de la zona, anulando de manera efectiva cualquier posibilidad de implantación. El hecho de que las zonas de algunos preembriones, particularmente aquellos con una deficiencia o pobre morfología, no adelgacen adecuadamente se ha postulado como una razón por la cual se presenta el fracaso de embarazo después de la fertilización In Vitro (FIV). Como ya se describió, crear un orificio artificial en las zonas gruesas (>15) puede promover la eclosión natural y la implantación del preembrión. Por otro lado, los preembriones con una zona delgada (<13um) pueden no beneficiarse o por el contrario verse afectados negativamente luego de realizar la eclosión asistida usanto Tyrode (14).

FORMA IRREGULAR DE ZONA PELUCIDA I PREEMBRIÓN

Los ovocitos y preembriones de forma ovoide no son extraños. Sin embargo, la posibilidad de que las mórulas de forma irregulares pueden tener compactación, futuro desarrollo, e incubación in vitro se ha visto que se puede ser algo más bajo que con los conceptos normales redondos. Los preembriones de formas irregulares son asociados generalmente con una zona pelucida anormal que puede estar completamente o parcialmente formada por dos capas moleculares. Esta composición binaria usualmente ocurre o comienzos del desarrollo del ovocito dentro del folículo. La AHA puede ayudar a promover el contracto adecuado célula-a-célula, la compactación, y la incubación en estos preembriones anormales.

COLOR ANORMAL DE ZONA PELUCIDA

Algunas veces, las zonas de color oscuro (de tono café / amarillento) se observan in vitro. Se ha notado que las zonas de algunos ovocitos, particularmente aquellos que definitivamente van a madurar en producto, progresivamente se oscurecen y se deterioran con un cultivo prolongado (observación personal). Cuando esta característica morfológica se nota, el preembrión consideramos es un candidato para AHA

Si habia oido esta técnica y como ha expuesto Ethia tambien habia leido alguno de sus inconvenientes.

No sé gema deberías preguntarle a tu médio exactamente que va a hacer, y porque cree él que en tu caso es interesante practicar está técnica.